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实验柱双染色凋亡细胞检测方案Protocol Annexin VP

作者:365bet外围投注发布时间:2019-02-15 00:21

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研究工具图|实验SCI |统计分析
膜联蛋白V?FITC(通道FL1)+ PI(通道FL2)的双染色细胞,阳性FITC + PI阴性细胞是初始细胞凋亡的100%。
首先
磷脂酰丝氨酸(PS)位于正常细胞膜,但在细胞凋亡的初始阶段,PS是从细胞膜到细胞膜的表面的内部重定向,它可以暴露于细胞外环境。膜联蛋白V-荧光素(FITC,PE)或生物素标记,并且标记的膜联蛋白V可以特异性结合于PS以高亲和力,分子量35?36 kD的中的Ca 2+依赖性磷脂 - 结合蛋白将其用作荧光探针,通过流式细胞术或荧光显微镜检测细胞凋亡。
碘化丙啶(PI)是一种核酸染料,不会穿透完整的细胞膜。然而,在进行性细胞和凋亡的死细胞中,PI可以穿过细胞膜并使其细胞核变红。因此,当膜联蛋白V与PI组合时,可以区分早期和晚期凋亡细胞的细胞以及细胞死亡。
其次,方法
1.将待分析细胞的浓度调节至10 6个细胞/ ml,并在1000rpm×5分钟(4℃)下取200μl。冲洗预先冷却1ml的PBS,1000rpm×5min(4℃)。
3.将细胞重悬于100μl结合缓冲液中,加入2μl膜联蛋白-V-FITC(20μg/ ml),轻轻混合并置于冰上15分钟。
4。转移至流动试管,加入400μlPBS,在机器前向每个样品中加入1μlPI(50μg/ ml),并在2分钟后进行快速检测。
同时,使用没有膜联蛋白V-FITC和PI的管作为阴性对照。
第三,这是一个需要注意的问题。
1,整个操作应尽可能顺畅,不要强迫细胞。
2.操作过程中避光,请在反应完成后尽快在1小时内进行测试。
第四,判断结果。
膜联蛋白V为横坐标,使用PI的作为垂直轴,左上象限是一个机械损伤的细胞,右上方为晚期凋亡细胞或坏死细胞,左下是正常阴性细胞。右下方是早期凋亡细胞。
(完)
你可以问更多的实验问题。
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